| Искусственные бактериальные хромосомы |
|
В 1992 г. X. Шизуя с соавторами описали новую бактериальную векторную систему, позволяющую клонировать фрагменты чужеродной ДНК размером до 300 тпн. Эта система названа ВАС (от англ. bacterial artificial chromosome - бактериальная искусственная хромосома). Она основана на использовании хорошо изученного полового фактора F Е. coli. Многие бактериальные молекулярные векторы основаны на высоко - или среднекопийных репликонах, которым часто свойственна структурная нестабильность встроенных фрагментов, сопровождаемая делегированием или перестройкой сегментов клонированных фрагментов ДНК. Особенно такая нестабильность характерна для протяженных фрагментов ДНК эукариотических организмов, поскольку они могут содержать различные семейства повторяющихся последовательностей. Фактор F кодирует гены, не только регулирующие его репликацию, но и контролирующие копийность. Регуляторные генетические локусы включают oriS, repE, par А и parB. Продукт гена обусловливает однонаправленную репликацию фактора F с района oriS, а продукты генов par А и parB обеспечивают правильное распределение фактора F между делящимися клетками и поддерживают его копийность на уровне 1-2 молекул. Вектор ВАС (рВАС) был создан на основе мини-F плазмиды рМВ0131, в которую по участку Sail встроили фрагмент ДНК, содержащий участки cos фага А и loxР фага Р1. Кроме того, встроенный фрагмент содержал уникальные участки гидролиза рестриктазами BamHl и Hindlll, предназначенные для клонирования фрагментов ДНК, промоторы фагов Т7 и Sp6 для синтеза in vitro радиоактивно или флуоресцентно меченных РНК-транскриптов в качестве гибридизационных проб для «прогулки по хромосоме» и участки редкощепящих рестриктаз, узнающих восьминуклеотидные последовательности. По участку loxР плазмидная ДНК может быть расщеплена белком Сге фага Pl, по cos - участку - соответствующим ферментом фага Я. Такие участки удобны для строго специфичного расщепления гибридных плазмид, мечения полученных концов и последующего рестрикционного картирования клонированных фрагментов изучаемого генома. |
Новинки от КМУ
|
$22.45
$22.45 Вы экономите: $0.00 |
|
$35.60
$35.60 Вы экономите: $0.00 |
|
$35.60
$35.60 Вы экономите: $0.00 |
|
$24.05
$24.05 Вы экономите: $0.00 |
|
$22.77
$22.77 Вы экономите: $0.00 |






