Авторизация






Cмена валюты


Поиск

Рекомендуем


Искусственные бактериальные хромосомы

В 1992 г. X. Шизуя с соавторами описали новую бактериальную векторную систему, по­зволяющую клонировать фрагменты чужерод­ной ДНК размером до 300 тпн. Эта система названа ВАС (от англ. bacterial artificial chromo­some - бактериальная искусственная хромо­сома). Она основана на использовании хорошо изученного полового фактора F Е. coli. Многие бактериальные молекулярные век­торы основаны на высоко - или среднекопийных репликонах, которым часто свойственна струк­турная нестабильность встроенных фрагментов, сопровождаемая делегированием или перестройкой сегментов клонированных фраг­ментов ДНК. Особенно такая нестабильность характерна для протяженных фрагментов ДНК эукариотических организмов, поскольку они могут содержать различные семейства повто­ряющихся последовательностей. Фактор F кодирует гены, не только регули­рующие его репликацию, но и контролирующие копийность. Регуляторные генетические локусы включают oriS, repE, par А и parB. Продукт гена обусловливает однонаправленную репликацию фактора F с района oriS, а продукты генов par А и parB обеспечивают правильное распределе­ние фактора F между делящимися клетками и поддерживают его копийность на уровне 1-2 молекул. Вектор ВАС (рВАС) был создан на основе мини-F плазмиды рМВ0131, в которую по участку Sail встроили фрагмент ДНК, содержа­щий участки cos фага А и loxР фага Р1. Кроме того, встроенный фрагмент содержал уникаль­ные участки гидролиза рестриктазами BamHl и Hindlll, предназначенные для клонирования фрагментов ДНК, промоторы фагов Т7 и Sp6 для синтеза in vitro радиоактивно или флуорес­центно меченных РНК-транскриптов в качестве гибридизационных проб для «прогулки по хро­мосоме» и участки редкощепящих рестриктаз, узнающих восьминуклеотидные последователь­ности. По участку loxР плазмидная ДНК может быть расщеплена белком Сге фага Pl, по cos - участку - соответствующим ферментом фа­га Я. Такие участки удобны для строго специ­фичного расщепления гибридных плазмид, мечения полученных концов и последующего рестрикционного картирования клонированных фрагментов изучаемого генома.

 

Интересное

счетчики