| МЕТОДЫ ОТБОРА ГИБРИДНЫХ КЛОНОВ |
|
Для примера рассмотрим схему гибридизации нуклеиновых кислот в колониях Escherichia coli. Колонии бактерий, выросшие после трансформации их плазмидной ДНК, перепечатывают на нитроцеллюлозный фильтр, который помещают в чашку на агаризованную питательную среду и инкубируют до появления на нем колоний клеток. Расположение колоний на фильтре соответствует их расположению на матричных чашках. Клетки в колониях на фильтре лизируют в условиях, вызывающих денатурацию ДНК. Затем на обработанных фильтрах проводят гибридизацию адсорбировавшейся ДНК исследуемых клонов с радиоактивно вы сокомеченным препаратом целевой ДНК (или РНК) в условиях, благоприятных для образования комплементарных комплексов. Клоны, в которых произошла гибридизация нуклеиновых кислот, обнаруживаются радиоавтографически. Соответствующие бактериальные клоны с матричных чашек переносят в питательную среду и наращивают. Часть выросшей культуры каждого клона помещают на хранение в глицерине при температуре - 70 °С, а из остальной части выделяют плазмидную ДНК и подвергают ее необходимому анализу. |
Новинки от КМУ
|
$22.39
$22.39 Вы экономите: $0.00 |
|
$35.50
$35.50 Вы экономите: $0.00 |
|
$35.50
$35.50 Вы экономите: $0.00 |
|
$23.99
$23.99 Вы экономите: $0.00 |
|
$22.71
$22.71 Вы экономите: $0.00 |






