Авторизация






Cмена валюты


Поиск

Рекомендуем


МЕТОДЫ ОТБОРА ГИБРИДНЫХ КЛОНОВ

Для примера рассмотрим схему гибридиза­ции нуклеиновых кислот в колониях Escheri­chia coli. Колонии бактерий, выросшие после трансформации их плазмидной ДНК, перепечатывают на нитроцеллюлозный фильтр, который помещают в чашку на агаризованную питательную среду и инкубируют до появления на нем колоний клеток. Расположение колоний на фильтре соответствует их расположению на матричных чашках. Клетки в колониях на фильт­ре лизируют в условиях, вызывающих денату­рацию ДНК. Затем на обработанных фильтрах проводят гибридизацию адсорбировавшейся ДНК исследуемых клонов с радиоактивно вы  сокомеченным препаратом целевой ДНК (или РНК) в условиях, благоприятных для образова­ния комплементарных комплексов. Клоны, в ко­торых произошла гибридизация нуклеиновых кислот, обнаруживаются радиоавтографически. Соответствующие бактериальные клоны с мат­ричных чашек переносят в питательную среду и наращивают. Часть выросшей культуры каж­дого клона помещают на хранение в глицерине при температуре - 70 °С, а из остальной части выделяют плазмидную ДНК и подвергают ее необходимому анализу.

 

Интересное

счетчики