При совпадении трансляционной рамки встроенной кДНК с рамкой гена 3-галактозидазы синтезируется химерный белок, на С-конце которого распола­гается последовательность чужеродного белка. Многочисленные эксперименты показали, что чужеродные белки в составе химеры с 3-галактозидазой в основном сохраняют свои иммуно - химические свойства. Поэтому после упаковки in vitro и высева на бактериальный газон полу­ченные клоны фагов (бляшки) можно подверг­нуть радиоиммуноанализу in situ с целью поис­ка гибридов, содержащих кДНК строго опреде­ленной мРНК (для белкового продукта которой имеются антитела). Векторы замещения имеют два или боль­ше мест действия рестриктазы на молекуле фа­говой ДНК. Заключенные между этими участ­ками фрагменты векторной ДНК замещаются донорными фрагментами ДНК. При этом про­исходит делеция ряда генов фага, что детекти­руется соответствующими генетическими ме­тодами. Необходимо подчеркнуть, что делетироваться могут только гены, несущественные для литического развития фага (область от гена J до гена N). На ДНК фагов, у которых отсутст­вует терминатор транскрипции tR2 (делеция nin5), размер делеции может быть увеличен вплоть до промотора pr. В этом случае фаг бу­дет жизнеспособным, несмотря на удаление жизненно важного в обычных условиях гена N, детерминирующего белок-антитерминатор. Рас­смотрим некоторые из векторов замещения на основе фага Я. До разработки более совершенных вектор­ных фагов самыми популярными векторами за­мещения на основе фага, предназначенным для клонирования сош-фрагментов, являлись штаммы Яgt-ЯC, Яgt-ЯB , в ко­торые можно встраивать EcoRI-фрагменты ДНК размером до 15,1 тпн. Популярность этих век­торов обусловлена тем, что их векторная часть Яgt-0 (правый и левый концы ДНК фага без внутреннего LcoRI-фрагмента) не образует жиз­неспособного фагового потомства, так как мо­лекула ДНК Agt-О слишком короткая. Гибрид­ные же ДНК дают жизнеспособное фаговое по­томство. Получен вариант фага Я, в ДНК которого можно встраивать EcoRI-фрагменты размером до 24 тпн , что составляет при­мерно половину гибридной фаговой ДНК и близко к предельному размеру возможной встав­ки в геном фага Я. Гибридные фаги на основе этого вектора легко отбираются по бляшкообразованию на газоне клеток Е. coli, лизогенных по фагу Р2, так как мутанты фага red~gamr размно­жаются на Е. coli(Р2), в то время как фаг Я, не имеющий такой двойной мутации (делеции), на указанном лизогене бляшек не образует. Удобны векторы замещения на основе транс - дуцируюхцих фагов Я .